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產品簡介
綠膿桿菌PCR檢測試劑盒說明書上海聯祖生物相關產品:基質金屬蛋白酶2/明膠酶A（MMP-2/Gelatinase A）ELISA試劑盒CLEC5A/MDL1 C型凝集素結構域家族5成員A100 ul兔基質金屬蛋白酶1（MMP-1）ELISA試劑盒
產品分類
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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 綠膿桿菌PCR檢測試劑盒說明書 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7675 |
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
熊果酸Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb (APC Conjuga)紅色基ITR(氨基-甲氧基-N,N-二基磺酰)
熊果酸；烏蘇酸(標準品)Aurora A (1F8) Mouse mAb5-溴-2,二吡啶
香葉木素SGK1 (D27C11) Rabbit mAb1-氨基-1-環丁基羧酸鹽酸鹽
香葉木素（標準品）SignalSilence® SP1 siRNA I氨基-3,5-二吡啶
金雀花,野靛Bak (D4E4) Rabbit mAb(R)-吲哚啉-2-羧酸
金雀花,野靛（標準品）Bak (D4E4) Rabbit mAb間三氟酚
厄貝沙坦SignalSilence® SP1 siRNA II2-氨基-磺酰基酚
5'-O-(4,4'-二甲氧基三基)-胸苷-3'-O-丁二酸Bora (D2B9) Rabbit mAb(叔丁氧羰基氨基)吡啶
水楊苷Phospho-MEK1/2 (Ser221) Blocking Peptide2,二-5-甲氧基
水楊苷(標準品)Phospho-MERIT40 (Ser29) Antibody砜
厚樸酚PathScan® Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) Chemiluminescent Sandwich ELISA Kit2'-氟-4'-羥基酮
厚樸酚(標準品)ITCH (D8Q6D) Rabbit mAb(1S)-1-(2R)-環氧基-2-基氨酸叔丁酯
埃索美拉唑鎂(三水)Bcl-11B (D6F1) XP® Rabbit mAb1-N-Boc-氧代-哌啶羧酸酯
蘆丁/蕓香葉苷Bcl-11B (D6F1) XP® Rabbit mAb1-Boc-哌啶酮
蘆丁/蕓香葉苷(標準品)Lapatinib2-萘甲酰
新橙皮苷二氫查爾酮WIPI1 Antibody2,二-5-硝基吡啶
新橙皮苷二氫查爾酮(標準品)Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb5-溴-2-吡啶
氧化苦參SignalSilence® Cbl-b siRNA I2-溴-5-硝基-6-甲基吡啶
1,25二羥基維生素D3(1,25 DHVD3)ELISA試劑盒DRD5/Dopamine Receptor D5 多巴受體D5100 ul
兔ELISA試劑盒DBC1 膀胱癌缺失基因1100 ul
兔膠原吡啶交聯(PYD)ELISA試劑盒Phospho-DBC1 (Thr454) 酸化膀胱癌缺失基因1100 ul
兔降鈣素原(PCT)ELISA試劑盒DBH 多巴β羥化酶100 ul
兔降鈣素基因相關肽(CGRP)ELISA試劑盒DCC 結腸直腸癌缺失基因100 ul
兔甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒DCIR/CLEC4A C型凝集素結構域家族4成員A100 ul
兔基質細胞衍生因子-1(SDF-1/CXCL12)ELISA試劑盒DCN/Decorin 核心蛋白聚糖100 ul
兔基質金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試劑盒CLEC5A/MDL1 C型凝集素結構域家族5成員A100 ul
兔基質金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試劑盒LAMP-3/DC-LAMP/CD208 CD20820 ul
綠膿桿菌PCR檢測試劑盒說明書鈣通道電壓依賴性β1蛋白抗體Bergapten中文名：佛手柑內酯別名：分子式：C12H8O4
酸性線粒體肌酸激酶抗體Angelicin中文名：別名：分子式：C11H6O3
肌肽二肽酶1抗體Psoralen中文名：補骨脂素別名：分子式：C11H6O3
膠原樣蛋白抗體Fraxidin中文名：嗪皮啶別名：分子式：C11H10O5
20號染色體開放閱讀框72抗體Agrimolide中文名：仙鶴草內酯別名：分子式：C18H18O5
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
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