注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
Maleic hydrazide potassium salt咪唑-4-甲酸甲酯 98%5-溴-4氯-3吲哚基β-D 半乳糖 99%

Diphenylcartazide辛二酸單甲酯 98%L-(−)-木糖 99%

Betaine HC1牛血清白蛋白，組分 V 分子生物學(xué)級(jí)烯酸 AR,>99%(GC)，包含180-200 ppm MEHQ 穩(wěn)定劑

Betaine牛血清白蛋白 96%甲基烯酸烯酯, 包含50-185 ppm MEHQ穩(wěn)定劑, 98%

Colchicine5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯對(duì)甲苯胺鹽 ≥99% (HPLC)甲基烯酸芐基酯 98%

Demecolcine2,2'-聯(lián)喹啉-4,4'-二甲酸二鈉 98%二甲基烯酸1,3-丁二酯, 含200 ppm MEHQ穩(wěn)定劑, 95%

Indomethacin5-溴-2'-脫氧尿苷 99%二甲基烯酸1,4-丁二酯, 含100ppm MEHQ 穩(wěn)定劑, 95%

Adesine3,5-二羥基苯甲酸 97%二烯酸1,3-丁二酯, 含500 ppm 對(duì)苯二酚（HQ）穩(wěn)定劑, 98%

CAMP二硫蘇糖 99%甲基烯酸叔丁酯, 包含有200 ppm MEHQ阻聚劑, 99%

CAMP，Na5,5'二硫代雙(2-甲酸) 98%甲基烯酸丁酯 GR,99%

5´-AMP3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉 99%烯酸叔丁酯 99%,含10-20 ppm MEHQ 作為穩(wěn)定劑

5'-AMP，2Na 3,3'-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽合物 98%甲基烯酸環(huán)己酯, 包含60 - 100 ppm MEHQ（氫醌單甲）穩(wěn)定劑,

5'-ADP，Na2異硫酸熒光素 96%二甲基烯酸二乙二酯 96%

5'-ATP，Na2谷胱甘肽(還原型)  98%甲基烯酸二乙基氨基乙酯, 包含100 ppm 吩噻, 99%

CytosineL-谷胱甘肽（氧化型）98%烯酸乙氧基乙氧基乙酯, >90%(GC),含1000ppmMEHQ穩(wěn)定劑

Cytidine鹽酸胍 分子生物學(xué)級(jí)，99.5%二烯酸二乙二酯 75%

3-氯酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Rpb1 CTD (Ser2) (E1Z3G) Rabbit mAb (Biotinylated)NDUFS1/NADH dehydrogenase (ubiquine) FeS protein 1 (75kD)  線粒體復(fù)合物NDUFS1蛋白抗體

氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)Phospho-Met (Tyr1234/1235) AntibodyNDUFAF4  激素調(diào)節(jié)增值細(xì)胞相關(guān)蛋白抗體

3-氯-4-胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Met (Tyr1234/1235) AntibodyNDUFA9  NDUFA9蛋白抗體

3-氯-4-氟苯胺(標(biāo)準(zhǔn)品)ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)NDUFA8  NADH脫氫酶α家族8抗體

屈(標(biāo)準(zhǔn)品)Met (25H2) Mouse mAbNDUFA10  NADH氧化還原酶輔酶10抗體

屈標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.58 μg/mL,基體：甲)Met (25H2) Mouse mAbNDUFA1  NADH氧化還原酶輔酶1抗體

鄰氯甲苯(標(biāo)準(zhǔn)品)ARP2 AntibodyNDST1  NDST1蛋白抗體

鄰甲酚(用于環(huán)境分析)ARP2 AntibodyNDRG4  抑癌基因NDRG4抗體

對(duì)甲酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Met (Tyr1234/1235) (3D7) Rabbit mAbNDRG3  抑癌基因NDRG3抗體

氫化鈣(AR,95%)Phospho-Met (Tyr1234/1235) (3D7) Rabbit mAbNDRG2  抑癌基因NDRG2抗體
化膿隱秘菌原名PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人肌球蛋白輕鏈(MLC)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myosin light Chain，MLC ELISA Kit*

人肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)ELISA試劑盒英文名稱：Human myosin light chain kinase,MLCK ELISA Kit進(jìn)口/分裝

人肌球蛋白重鏈(MHC)ELISA試劑盒 英文名稱：Human myosin heavy chain,MHC ELISA Kit進(jìn)口/分裝

人肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Creatine Kinase，CK ELISA Kit*

人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Creatine Kinase MB isoenzyme，CK-MB ELISA Kit進(jìn)口/分裝

人肌細(xì)胞生成素(MYOG)ELISA試劑盒英文名稱：Human myogenin,MYOG ELISA Kit*小鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。