注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
15mL DNA 離心超濾管 （90-150 KD）1個說明書Anti-EPOR 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

MnCl2溶液，25mM，PCR 級5mL品牌Anti-EphA4 R/Eph receptor A4 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

石蠟油，PCR 級10mL多少錢Anti-EIF2AK2/PKR 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 轉(zhuǎn)運蛋白

dTTP 溶液，100mM0.5mL哪里有賣Anti-phospho-eIF4E(Ser209) 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 表觀遺傳學(xué)

G（5´）ppp（5´）G 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD說明書Anti-EPHB4 研究領(lǐng)域  心血管 免疫學(xué)

單細(xì)胞懸浮液1mL說明書Anti-ERK1/2(p44/42 MAPK) 研究領(lǐng)域  心血管 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

真菌種屬鑒定 PCR Mix 5100 次說明書Anti-Enkephalin/P-ENK 研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

φX174RF Ⅱ DNA30μg說明書Anti-ERK4 研究領(lǐng)域  心血管 免疫學(xué)

菌落 PCR 試劑盒 2.050 次說明書Anti-ET-3/Endothelin 3 研究領(lǐng)域  心血管 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長因子和激素 激酶和磷酸酶 泛素

素鈉溶液 ,50mg/mL1mL多少錢Anti-ETS2 研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

惡性瘧PCR檢測試劑盒保存Anti-ENaCg/γENaC 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

玉米MON810/MSPCR檢測試劑盒說明書Anti-ERAS/HRAS2 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

轉(zhuǎn)基因植物PAT基因PCR檢測試劑盒說明書Anti-ETV7 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

人活化蛋白CElisa Kit說明書Anti-EEF2 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期蛋白

小鼠乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶Elisa Kit說明書Anti-EEF2k 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞周期蛋白

銀鍛苷Immuglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1  免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1 雌激素受體IgG

3－乙?；橄闼酑D133  造血干細(xì)胞抗原CD133 雌激素受體αIgG

3－乙?；?1－酮CD133  造血干細(xì)胞抗原（多肽抗原） 抗人磷酸化雌激素受體αIgG

芫花素H5N1-H5  禽流感H5亞型全病毒 雌激素受體α/βIgG

野鷲尾苷Newcastle disease virus  雞新城疫疫苗（雞瘟4型混合病毒） 細(xì)胞核受體Rev-ErbαIgG

異甜菊SDF-1/CXCL12  基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1 磷酸化細(xì)胞核受體Rev-ErbαIgG

標(biāo)準(zhǔn)品Bacillus anthraci  炭疽桿菌菌體蛋白抗體

原阿片堿ADCY1 peptide  腺苷酸環(huán)化酶1多肽抗原 雌激素受體βIgG

異蓮心堿c-erbB-2蛋白  c-erbB-2蛋白（抗原） 雌激素受體β IgG

α-亞油酸ChAT(Choline Acetyltransferase)  膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（抗原） 兔抗人、大、小鼠磷酸化雌激素受體αIgG
蜂房蜜蜂球菌PCR檢測試劑盒說明書大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光5克

大鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫升

大鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫克

大鼠去甲腎上腺素(NA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠固(ALD)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃25毫升
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。