熒光-PCR法試劑盒具備高特異性，與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；檢測靈敏度可達(dá)10-100拷貝；該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；多種雙重PCR檢測及三重PCR檢測試劑盒。
熒光-PCR法中的普通PCR和qPCR引物設(shè)計(jì)原則有哪些區(qū)別呢？
一、二者的相同之處
序列的查找是一致的；
序列選取應(yīng)在基因的保守區(qū)段；
選取合適的擴(kuò)增片段大小
避免引物自身或與引物之間形成4個(gè)或4個(gè)以上連續(xù)配對；
避免引物自身形成環(huán)狀發(fā)卡結(jié)構(gòu)；
Tm值在55-65℃，GC含量在40%-60%；
引物之間的TM相差避免超過2℃；
引物的3’端避免出現(xiàn)3個(gè)或3個(gè)以上連續(xù)相同的堿基。
二、二者的不同之處
qPCR產(chǎn)物長度PCR要求在300bp以內(nèi)，一般先選80-150bp之間；多對目的基因同時(shí)擴(kuò)增，文獻(xiàn)上查來的引物條件會不同，需要設(shè)計(jì)盡可能條件一致的引物；目的基因含量比較低時(shí)，需要設(shè)計(jì)靈敏度比較高的引物；相對電泳法，qPCR靈敏度比較高，對引物的要求更高，引物二聚體要少，熔解曲線要求單一產(chǎn)物；PCR的目的是進(jìn)行定量或者相對定量，對擴(kuò)增的效率有要求，對引物的二級結(jié)構(gòu)要求高。
普通PCR引物根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求不同，長度一般是從150bp到幾千bp不等；對二級結(jié)構(gòu)要求沒有qPCR高；對擴(kuò)增效率要求不高；可選用梯度PCR儀，選擇不同退火溫度，對引物退火溫度要求不需要一致。
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更新時(shí)間：2023-03-13
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