熒光-PCR法不同于其他PCR的地方在于PCR過(guò)程中利用熒光染料在光刺激下釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，熒光信號(hào)變量與擴(kuò)增產(chǎn)物變量成正比，并通過(guò)足夠靈敏的自動(dòng)化儀器實(shí)現(xiàn)對(duì)熒光的采集和分析以達(dá)到對(duì)原始模板量定量的目的。
熒光基團(tuán)通常各自擁有單一的光吸收峰。在光的刺激下，熒光基團(tuán)吸收光的能量后通常以三種方式釋放出能量：
1.光能：許多熒光基團(tuán)吸收光能后仍舊以光能形式釋放能量，并且發(fā)射光的峰值大于吸收峰。
2.熱能：某些熒光基團(tuán)吸收光能后，能量轉(zhuǎn)換為熱量擴(kuò)散到環(huán)境中。
3.轉(zhuǎn)移給臨近的分子：當(dāng)臨近的分子滿足發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的要求時(shí)，能量從熒光基團(tuán)傳遞到臨近的分子。
當(dāng)某個(gè)熒光基團(tuán)的發(fā)射譜與另一熒光基團(tuán)的吸收光譜發(fā)生重疊，且兩個(gè)基團(tuán)距離足夠近時(shí)，能量可以從短波長(zhǎng)（高能量）的熒光基團(tuán)傳遞到長(zhǎng)波長(zhǎng)（低能量）的熒光基團(tuán)，這個(gè)過(guò)程稱為熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)，實(shí)際相當(dāng)于將短波長(zhǎng)熒光基團(tuán)釋放的熒光屏蔽。
熒光-PCR法區(qū)別于其他PCR法主要有以下優(yōu)點(diǎn)：
1.全封閉反應(yīng)，無(wú)需PCR后處理；
2.特異性強(qiáng)，靈敏度高；
3.采用對(duì)數(shù)期分析，摒棄終點(diǎn)數(shù)據(jù)，定量準(zhǔn)確；
4.定量范圍寬，可達(dá)到10個(gè)數(shù)量級(jí)；
5.儀器在線式實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，結(jié)果直觀，避免人為判斷；
6.可實(shí)現(xiàn)一管雙檢或多檢；
7.操作安全，縮短時(shí)間，提高效率；
8.利于自動(dòng)化和聯(lián)網(wǎng)管理。
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更新時(shí)間：2021-08-13
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