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TECHNICAL ARTICLES
更新時間：2021-06-23
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C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞；RMA培養的具體無菌技術要點：
1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后，才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株，即使培養基*相同也不可共用培養基，以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后，才能進行下一個細胞株的操作。
2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成，請勿在邊緣非無菌區域進行操作。
3. 小心取用無菌實驗物品，避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應當首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作，并選擇適當等級的無菌操作臺進行（至少是Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol的產生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測下列項目：
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。
5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。
6. 水槽內可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。
NRK-52E，大鼠腎細胞
H9c2大鼠心肌細胞（ATCC來源）
C2C12, 小鼠肌原細胞
NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系
大鼠骨髓間充質干細胞（BMSCs）
HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系
CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞
SF9, 昆蟲卵巢細胞
BRL 3A, 大鼠肝正常細胞
HK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞
HET-1A, 人食管上皮細胞
RGC-5, 小鼠視網膜神經節細胞
GC-1, 鼠精原細胞
293A，人胚腎上皮細胞系（腺病毒包裝級別）
hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞
293T, SV40轉化的人胚腎上皮細胞系
EPC, 大鼠血管內皮祖細胞
HBE, 正常人支氣管上皮細胞系
HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細胞
HUVEC-12, 人臍靜脈血管內皮細胞系
HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞
HAVSMC, 人主動脈平滑肌細胞
LX-2, 人肝星形細胞株
3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞
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