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更新時間：2023-06-07
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RIPA 裂解液 （ 強 ）00mL操作步驟：
RIPA 裂解液 ( 強 )00mL哪里有賣切取含有目的DNA 片段的瓊脂糖凝膠條帶。
● 盡量切除不含有目的DNA 部分的凝膠，減少凝膠體積，提高DNA 回收率。
● 切膠時，請使用長波長UV （360 nm ）光盒。且不要將DNA 長時間暴露在紫外燈下，以防DNA 損傷。
2 稱取凝膠的重量近似地確定其體積。
● 凝膠重量的稱量方法：取.5 ml 離心管電子天平稱初質量，切膠裝在離心管后稱終質量，兩者差即為膠的質量。不同離心管的重量可能有差異，因此，每個離心管的重量需單獨稱量。
3 按照每00 mg 瓊脂糖凝膠對應00 µl 溶液BD 的比例，向離心管中加入溶液BD。
4 50 ℃水浴7-0min，直至凝膠*溶化。期間需要振蕩混合3 次。
● 瓊脂糖必須*融化，以免堵塞柱子，嚴重影響DNA 段的回收效率。
● 如果總體積大于500 µl，可適當增加溶膠時間。
● 若此時溶液變紅，可加0 µl 3M NaAC （pH 5.2）。
5 將步驟4 所獲溶液置于DNA 純化柱中，靜置2min 。
● 膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為純化柱在較高溫度時結合DNA 的能力較弱。
6 2,000 rpm 離心min。若溶液量大于DNA 純化柱的容積，可分兩次離心，棄濾液。
● 此時DNA 被吸附于DNA 純化柱中的硅膠膜上。
7 加入500 µl 溶液BD。2,000 rpm, 離心min，棄濾液
8 加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm, 離心min，棄濾液。
● 溶液PE 初次使用前用無水乙醇按: 4 稀釋，即含80% 乙醇。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫，以獲得高質量DNA 段。
9 加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm, 離心min，棄濾液。
0 2,000 rpm 離心 3min ，以*去除純化柱中的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免殘留乙醇影響后續酶促反應。同時也利于DNA 段的充分溶解。
將離心柱置于新的.5 ml 離心管中。向純化柱的處，懸空滴加30-00 µl 溶液Eluent （60℃預熱），靜置2min 。2,000 rpm 離心min，管底即為目的DNA 段。貯存于-20℃。
● 溶液Eluent 可用無菌雙蒸水代替，但其pH 需為8.0-8.5，加入體積視DNA 目的段的多少、用戶對目的濃度要求而定。
● 對溶液Eluent 60℃預熱，會提高提取DNA 目的段的產量。
當前位置：